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明明都是按照实验步骤勤勤恳恳做下去，为什么 western blot一出结果就翻车？

第一反应就是投诉抗体公司？抗体表示很委屈。小编当年就是在 WB 的历练下从小白蜕变到实验高手，回看就是满满的血泪史……

先浅浅的介绍一下今天的主角——蛋白质免疫印迹，点击下方即可收藏我们为大家准备好的 WB 专题，一键订阅、每周更新。

在筛选 WB 图时，是否时常发现一些奇奇怪怪的结果？其中实验中各种造成的污染是这些「怪图」产生的一大原因！

1. 试剂污染

结果：可能导致抗体结合到封闭剂，出现黑点或者黑斑

解决：使用短时间内配置的试剂；过滤封闭液；选用其他类型的封闭液

2. 抗体污染

结果：出现非特异性条带

解决：更换出现问题的一抗或者二抗；或者适当延长洗涤时间，或增加洗涤次数

3. 细胞污染

结果：细胞样品的交叉污染、分化和传代次数过多，都会使蛋白的表达谱发生变化而出现杂带

解决：筛选细胞来源（拒绝来路不明细胞）；规范细胞传代的各个步骤，避免细胞交叉感染；控制细胞的传代次数，不同细胞传代次数上限不定

4. 操作污染

结果：出现非均一性的背景

解决：复盘出现可能出现问题的那一环节，重做

5.细菌污染

结果：凝胶染色不均匀

解决：4℃ 保存抗体并使用新鲜的缓冲液浸泡凝胶；确保在振荡孵育时抗体充分浸没膜。

6.缓冲液污染

结果：导致图片出现高背景

解决：使用新的缓冲液，过滤缓冲液

当然，除了 WB 污染问题，丁香实验小程序上面还有很多学长学姐分享的 WB 经验贴：

「道理都懂，但还是很难完美完成每个实验」

理想和现实之间总是有些差距，这次不行，静待下次，主要是要学会分辨错误原因，每次解决一点点。

当然有问题可以进入丁香实验小程序，搜索相关内容，提前了解实验之「坑」。还能向学长学姐提问，让他们来为你支招～

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实验问题在线问，学长学姐在线答

策划｜蛋黄

排版｜77

图片｜丁香实验设计团队